Anya Hein, embriologa del team di embriologia per dieci persone presso ORM Fertility, condivide alcune intuizioni sul tempo critico che gli embrioni dei pazienti trascorrono crescendo e sviluppandosi in laboratorio.
Quando si sceglie un fornitore di fertilità, sceglierne uno di cui ti fidi e con cui ti senti a tuo agio è una parte essenziale del processo. I pazienti in genere si concentrano sul proprio medico individuale, ma non sempre riescono a saperne di più sul laboratorio di embriologia e sul team di embriologia che lavorerà per loro conto nella selezione di un fornitore di fertilità.
Quando i pazienti imparano di più sul processo di fecondazione in vitro, si rendono conto del ruolo estremamente cruciale che il laboratorio e il team di embriologia svolgeranno nel loro viaggio verso la genitorialità.
Ogni laboratorio e team di embriologia ha le sue caratteristiche uniche che possono contribuire al successo, quindi è utile che i pazienti conoscano meglio questa parte del loro team di fecondazione in vitro e abbiano fiducia in loro.
Come embriologo, "Guardiano degli embrioni", come ci chiamiamo nel nostro laboratorio, so che può sembrare che vogliamo mantenere tutta la magia che accade nel nostro piccolo laboratorio a noi stessi.
Tende a esserci un velo di mistero su ciò che sta accadendo nel laboratorio di fecondazione in vitro. Come paziente, probabilmente non incontrerai uno di noi quando inizi il tuo ciclo e potresti non incontrarci nemmeno il giorno del recupero delle uova. Un paziente potrebbe chiedersi; ci sono anche embriologi lì dentro? Che cosa stanno facendo con i miei gameti? È un significativo salto di fiducia che chiediamo ai nostri pazienti di avere una fiducia incommensurabile in noi mentre ci prendiamo cura delle loro speranze di diventare genitori.
Il processo di fecondazione in vitro richiede un livello di stress emotivo e un'immensa pazienza che la maggior parte di noi deve ancora sperimentare. In ogni fase, chiediamo ai pazienti di aspettare, aspettare ancora e poi aspettare ancora. Forse un po 'di intuizione nel processo potrebbe far sentire il cuore un po' più leggero e alleviare il peso di tutta quell'attesa.
È importante ricordare che ogni clinica è diversa e le loro percentuali di successo possono essere influenzate da molti fattori, non solo dalla qualità del loro laboratorio e team di embriologia. Tuttavia, le tecniche generali e il flusso degli embrioni all'interno di ogni laboratorio saranno molto simili.
Preparazione per il giorno 0
Una paziente, o una donna che cerca di concepire con le proprie uova o un donatore di ovociti, sarà per circa 10-12 giorni sottoposta a farmaci specifici progettati per stimolare le sue ovaie a produrre quante più uova possibile. Ogni donna ha una coorte di "pre-uova" disponibili ogni mese, note come follicoli.
Mentre naturalmente solo uno o due di questi follicoli diventeranno un uovo maturo e un ovulato, la stimolazione consentirà alla maggior parte di questi follicoli disponibili di crescere, maturare ed essere disponibili per l'inseminazione in laboratorio. Una volta che i follicoli sono cresciuti a una dimensione desiderabile, il paziente sarà "innescato" per il recupero delle uova, che è noto come Giorno 0. I gameti (sperma e uova) saranno nel laboratorio di embriologia dal Giorno 0 al Giorno 6 (fase della blastocisti ).
Giorno 0
Il giorno della raccolta delle uova, le uova e lo sperma si uniranno. Ciò può avvenire in due modi diversi, iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi (ICSI) o inseminazione standard.
L'ICSI prevede la rimozione delle cellule del cumulo simili a cuscini utilizzando un enzima chiamato ialuronidasi al fine di visualizzare la maturità di ciascun uovo prima di iniettare lo sperma. Nella nostra clinica, circa il 90% dei casi utilizzerà l'ICSI per massimizzare il numero di uova fecondate e aiutare a combattere il basso numero di spermatozoi e / o la motilità.
I livelli di maturità dell'uovo possono essere osservati al microscopio una volta rimosse le cellule del cumulo. I tre gradi di maturità sono definiti come la vescicola germinale (GV), che è la più immatura, la metafase I (MI o GVBD) e la metafase II (MII o PB).
Solo quando un uovo sembra avere un corpo polare (stadio MII) presente, può essere fecondato. È molto utile che le uova ci mostrino quando sono mature, quindi sappiamo quali sono pronte ad accettare uno sperma e possibilmente fertilizzare. In media, il 75% delle uova raccolte sarà maturo.
È importante rendersi conto che tutto ciò che accade in laboratorio e in natura è un processo, non un momento. Quando eseguiamo ICSI, non si sa immediatamente se quelle uova fertilizzeranno. Iniziamo l'ICSI e le inseminazioni dopo l'ora di pranzo ed è una delle ultime cose che facciamo in laboratorio per la giornata. Iniettiamo le uova, sussurriamo le nostre buone intenzioni e le nascondiamo nelle loro incubatrici calde per la notte. Applicando un tempismo accurato e una pazienza vigile, abbiamo fiducia che il processo continuerà e che la magia accadrà tra quelle uova e quello sperma.
L'inseminazione standard prevede che le uova recuperate vengano divise tra diverse gocce di terreno di coltura e quindi inoculate con spermatozoi puliti e mobili. Queste uova non saranno spogliate delle loro cellule cumulo e quindi la loro maturità non sarà nota fino al giorno successivo, al controllo della fecondazione.
Giorni 1-3
Il primo giorno, circa 1-16 ore dopo che abbiamo introdotto lo sperma nelle uova, controlliamo per vedere quante ne hanno fecondate, separando le uova fecondate da quelle non fertilizzate e da quelle fertilizzate in modo anomalo.
La fecondazione è visibile ai nostri occhi solo per alcune ore prima che l'embrione inizi a dividersi. Per quelle uova che sono state inseminate con l'inseminazione standard, dobbiamo prima rimuovere le cellule del cumulo prima di poter vedere la fecondazione. La ialuronidasi è un enzima presente naturalmente nello sperma, quindi queste uova sono ora facilmente separabili dal loro cumulo dopo una serata con molti spermatozoi.
Quando guardiamo giù al microscopio possiamo vedere due piccole sfere nelle uova; che designano quelli normalmente fertilizzati dal resto. Queste piccole sfere sono chiamate pronuclei; ne cerchiamo due (2pn). Quando ne vediamo due sappiamo che sono presenti sia DNA paterno (sperma) sia DNA materno (uovo).
Prevediamo che circa il 75-80% delle uova mature fertilizzi normalmente. Anche in questo caso, vediamo una riduzione delle uova rispetto al numero con cui abbiamo iniziato; generalmente meno uova rispetto ai follicoli, meno uova mature rispetto alle uova totali e ora meno uova fecondate (zigoti) rispetto alle uova inseminate. Ci sono molte ragioni per cui le uova non fertilizzano. Può esserci un fattore uovo dovuto all'età o alla qualità, o fattori dello sperma che impediscono la fecondazione delle uova, o potenzialmente una combinazione di uovo e sperma.
Dopo aver verificato la fertilizzazione, vogliamo rimetterli nella loro incubatrice il più rapidamente possibile. Lì prosperano e crescono. Li lasciamo a se stessi fino al terzo giorno.
Giorni 3-4
Il terzo giorno, valutiamo la crescita degli embrioni fino a questo punto. Se è pianificato lo screening completo del cromosoma (CCS), faremo anche un piccolo foro nella zona pellucida (guscio) di ciascun embrione. Gli embrioni si schiuderanno naturalmente dalle loro zone prima di impiantarsi nell'utero, quindi è una parte comune dei loro progressi; diamo solo agli embrioni una piccola spinta in anticipo.
Questa schiusa assistita aiuterà a semplificare il processo di biopsia il giorno 5/6. Circa il 70-80% dei casi nella nostra clinica utilizza CCS. Quando estraiamo gli embrioni e li spostiamo nei supporti appropriati per questa fase di crescita, li classifichiamo in base al numero di cellule, percentuale di frammentazione e simmetria.
Oggi vogliamo che gli embrioni siano circa 6-8 cellule. Gli embrioni stanno iniziando a distinguersi l'uno dall'altro in questa fase. Circa il 95% degli embrioni iniziali continuerà a crescere fino al terzo giorno.
Giorni 5-6
La prossima volta che guardiamo gli embrioni è il Giorno 5. Senza interruzioni, tra il Giorno 3 e il Giorno 5 gli embrioni rendono la transizione molto difficile da un embrione di fase di scollatura multicellulare a una morula.
Quindi entro il giorno 5/6, effettuano il passaggio da una morula a una blastocisti.
La blastocisti è lo stadio in cui inizia la differenziazione. Nella fase della morula, le cellule dell'embrione si compattano insieme e decidono quali cellule tra loro continueranno a dividersi e diventeranno la massa cellulare interna (ICM) e quali diventeranno il trofectoderma. Queste sono le parti cruciali che cerchiamo nell'embrione nella fase della blastocisti. L'ICM è il piccolo raggruppamento di cellule all'interno dell'embrione che diventano il bambino e il trofectoderma è il nido d'ape come le cellule che circondano l'ICM che diventerà la placenta.
Una volta raggiunto questo stadio, l'ambiente di laboratorio diventa inadatto per un'ulteriore crescita. Pertanto, il giorno 5/6 sono i giorni in cui questi embrioni vengono o trasferiti nuovamente in un utero, vetrificati (un metodo di raffreddamento rapido dell'embrione, necessario per una conservazione sospesa prolungata) o sottoposti a biopsia per i test CCS e poi vetrificati. Come per tutte le cose in natura, non tutti gli embrioni crescono allo stesso ritmo. Vi è una gamma di crescita accettabile; pertanto, cerchiamo gli stessi segni di vitalità e crescita nel Giorno 6 come nel Giorno 5.
A causa dell'elevato livello di energia e di "perfezione" necessari per crescere da un embrione in fase di scissione a una blastocisti, in media osserviamo solo circa la metà degli embrioni vitali del terzo giorno si sviluppano fino al giorno 3/5. Alcuni embrioni possono crescere fino allo stadio di blastocisti ma non sono di qualità abbastanza forte da essere trasferiti o sottoposti a biopsia.
Ci possono essere molte ragioni per cui gli embrioni non continuano a crescere fino al giorno 5/6; fattore dello sperma, fattore uovo, mancanza di energia mitocondriale sufficiente o anomalie cromosomiche, l'elenco potrebbe continuare all'infinito. Qualunque sia il fattore, quando vediamo cadere le uova e poi abbandonare gli embrioni c'è un'anomalia all'interno dell'uovo o dell'embrione che impedisce che continui nel processo. Anche con le condizioni perfette, possono mancare i meccanismi interni per continuare a prosperare. Ed è molto importante ricordare che questi embrioni non farebbero un bambino.
Durante il processo di fecondazione in vitro si deve ricordare che i follicoli non eguagliano le uova, le uova non uguagliano gli zigoti, gli zigoti non eguagliano le blastocisti e le blastocisti non eguagliano le gravidanze. Ogni ciclo sarà diverso e può senza dubbio essere estremamente frustrante per i pazienti trovarsi in una situazione in cui hanno scarso controllo. Può essere utile iniziare un trattamento con aspettative ragionevoli, almeno una comprensione di base del processo di embriologia e una visione verso un quadro più ampio. L'obiettivo finale è essere un bambino sano e ogni bambino sano richiede solo un embrione normale che ha avuto un inizio premuroso.
Siate certi che, indipendentemente dal tempo o dalla difficoltà del vostro viaggio, il vostro team di embriologia sarà lì a prendervi cura dei vostri embrioni con una mano esperta e un cuore tenero, pronti a fermarvi a qualsiasi urto sulla strada.
